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檢定/校準(zhǔn)可見(jiàn)分光光度計(jì)不容忽視的點(diǎn)

可見(jiàn)分光光度計(jì)是化學(xué)分析中常用的計(jì)量器具，它的準(zhǔn)確與否直接關(guān)系到測(cè)量數(shù)據(jù)的可靠真實(shí)。所以檢定/校準(zhǔn)的準(zhǔn)確是計(jì)量工作中的重點(diǎn)。本文針對(duì)可見(jiàn)分光光度計(jì)的檢定/校準(zhǔn)應(yīng)關(guān)注的點(diǎn)進(jìn)行論述。

可見(jiàn)分光光度計(jì)是一種結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)潔、使用方便的單光束分光光度計(jì)，分析測(cè)量的原理是基于郎伯-比爾定律，利用樣品對(duì)單色光的選擇吸收特性來(lái)測(cè)量和記錄其吸收程度（吸光度），對(duì)樣品進(jìn)行定性和定量分析。其原理是：當(dāng)一束單色光照射待測(cè)物質(zhì)的溶液時(shí)，當(dāng)某一定頻率（或波長(zhǎng)）的可見(jiàn)光所具有的能級(jí)差相適應(yīng)（即△E=E2-E1=hf）時(shí)，待測(cè)物將對(duì)該頻率（波長(zhǎng)）的可見(jiàn)光產(chǎn)生選擇性吸收。用可見(jiàn)分光光度計(jì)可以測(cè)量和記錄其吸收程度（吸光度）。由于在一定的條件下，吸光度 A與待測(cè)物質(zhì)的濃度 C及吸收池長(zhǎng)度 L的乘積成正比，即 A=KCL，所以，在測(cè)得吸光度 A 后，可采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法、比較法以及標(biāo)準(zhǔn)加入法等方法進(jìn)行定量分析。由上可知在實(shí)際的檢定/校準(zhǔn)過(guò)程中，關(guān)系到可見(jiàn)分光光度準(zhǔn)確度主要有其波長(zhǎng)、配套的比色皿及用于檢測(cè)的計(jì)量標(biāo)準(zhǔn)器，關(guān)注這三個(gè)點(diǎn)對(duì)可見(jiàn)分光光度計(jì)的準(zhǔn)確判定起到事半功倍的作用.

（1）可見(jiàn)分光光度計(jì)的波長(zhǎng)。檢定/校準(zhǔn)前對(duì)可見(jiàn)分光光度計(jì)的光路進(jìn)行檢查。在排除了實(shí)驗(yàn)室環(huán)境條件差，如磁光度計(jì)的光路進(jìn)行檢查。在排除了實(shí)驗(yàn)室環(huán)境條件差，如磁路容易造成光路故障等因素，將其波長(zhǎng)置于 580nm處，狹縫置于 2nm范圍以內(nèi)，用白色的濾紙置于光路中，觀察光斑的顏色，來(lái)將波長(zhǎng)大致調(diào)整至接近準(zhǔn)確的范圍內(nèi)。波長(zhǎng)調(diào)整后，按照規(guī)程的要求對(duì)波長(zhǎng)進(jìn)行檢定，當(dāng)發(fā)現(xiàn)波長(zhǎng)超差時(shí)，可繼續(xù)調(diào)整波長(zhǎng)，直至檢測(cè)數(shù)據(jù)符合要求。

（2）要重視對(duì)比色皿成套性的檢定。在可見(jiàn)分光光度計(jì)的檢定/校準(zhǔn)中，我們往往重視對(duì)其本身的檢定，而容易忽視對(duì)配套使用的比色皿成套性的檢定，這也是造成儀器分析結(jié)果偏離或超差的一個(gè)重要因素。很多可見(jiàn)分光光度操作人員由于對(duì)結(jié)構(gòu)及分析原理了解不夠，也容易忽視這一問(wèn)題,從郎伯-比爾定律公式中不難看出，如果比色皿杯子的尺寸以及透光性發(fā)生變化，將直接影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。在檢定/校準(zhǔn)中，有時(shí)會(huì)遇到用戶反映檢測(cè)結(jié)果有問(wèn)題，懷疑是儀器波長(zhǎng)超差，但到現(xiàn)場(chǎng)經(jīng)我們認(rèn)真反復(fù)對(duì)儀器進(jìn)行檢定后，發(fā)現(xiàn)儀器各項(xiàng)技術(shù)指標(biāo)沒(méi)有大的問(wèn)題，基本符合規(guī)程的要求，再檢查溶液的配制，也沒(méi)有發(fā)現(xiàn)較大的問(wèn)題，zui后發(fā)現(xiàn)配套使用的兩個(gè)比色皿杯，從外觀上看顏色深淺不一致，經(jīng)檢定后發(fā)現(xiàn)兩個(gè)比色皿示值誤差在 10%左右，嚴(yán)重超差。經(jīng)詢問(wèn)得知，造成這兩個(gè)杯子顏色不一致的原因是：操作人員習(xí)慣做法是盛放參比溶液與盛放樣品溶液的比色皿長(zhǎng)期固定不變且不注意及時(shí)清洗，因而造成盛放樣品溶液的比色皿杯由于污染程度相對(duì)嚴(yán)重而使比色皿表面顏色變深，久而久之，兩個(gè)比色皿透射比出現(xiàn)較大的誤差。針對(duì)這一情況，我們告訴操作人員，配套使用盛放參比液比色皿與盛放樣品溶液的

比色皿不是固定不變的，可以互換使用，但必須保持清潔，用完后應(yīng)及時(shí)用蒸餾水作參比檢查其成套性，其誤差不應(yīng)超過(guò) 0.5%，這一點(diǎn)在規(guī)程上是有明確規(guī)定的，另外，比色皿透光面如遭到污染，應(yīng)使用蒸餾水緩緩沖洗，然后再用潔凈而干燥的細(xì)布或鏡頭紙輕輕擦凈，不要用毛刷或?yàn)V紙等硬性物質(zhì)擦試，以免出現(xiàn)劃痕，造成比色皿報(bào)廢，使用完畢后，一定要及時(shí)給予清洗。清洗時(shí)，可用微量濃度的酸或一定濃度有機(jī)溶劑浸泡清洗，然后用蒸餾水沖洗，zui后應(yīng)在干凈的環(huán)境中風(fēng)干，切勿用熱風(fēng)烘烤吹干，以免使吸收池形狀、尺寸發(fā)生微小變化，因而影響光程直至檢測(cè)結(jié)果。

（3）我們檢定使用的主標(biāo)準(zhǔn)器為濾光片，爭(zhēng)取得到更多的信息，以便靈活使用。在檢定中，遇到的大多數(shù)是進(jìn)口儀器，自動(dòng)化程度高，對(duì)儀器設(shè)定好使用條件，讓操作人員按部就班地操作，不允許隨意改變?cè)O(shè)定條件，以免儀器出現(xiàn)故障，但有時(shí)會(huì)給我們檢定工作帶來(lái)一定的困難，如何在這

種情況下進(jìn)行檢定工作，就需要我們靈活地使用檢定規(guī)程。

比如在檢定中，參考結(jié)果經(jīng)常是吸光度值而不是透射比值，而我們的規(guī)程和主標(biāo)準(zhǔn)器的檢定證書(shū)按常規(guī)給出的值卻是透射比值，這就為工作帶來(lái)不便。雖然二者之間可以互相換算，但在現(xiàn)場(chǎng)檢定中，為了更快、更便捷地了解儀器，我們的計(jì)量標(biāo)準(zhǔn)在上級(jí)部門(mén)檢定時(shí)，如果能在給出透射比標(biāo)準(zhǔn)值的同時(shí)再給出吸光度標(biāo)準(zhǔn)值更好。

結(jié)語(yǔ)

可見(jiàn)分光光度計(jì)屬于實(shí)驗(yàn)室常用計(jì)量?jī)x器的一種，按國(guó)家檢定規(guī)程應(yīng)定期檢定，進(jìn)行量值溯源。只有熟練地操作儀器，定期檢定，才能確保儀器波長(zhǎng)的準(zhǔn)確度，從而才能保證測(cè)定的準(zhǔn)確性，同時(shí)還能及時(shí)發(fā)現(xiàn)儀器存在的問(wèn)題。